Дијагностички методи за вирусни и вирусни болести на растенијата

Визуелен дијагностички метод

Во повеќето случаи, не е тешко да се утврди вирусна природа на болеста. Обично тоа се одредува со надворешни знаци, како што се линеарни хлоротични обрасци или прстенести обрасци на млади лисја. Сепак, нивната идентификација е често тешка, бидејќи вирусите имаат асимптоматски (латентен) карактер на развој. Симптомите зависат од состојбата на организмот, агресивноста на вирусот на патогенот, условите на животната средина и должината на времето што вирусот или вирусот останува во клетките на домаќинот. На пример, симптомите на болеста се јасно изразени во растенија кои растат во светла светлина и на умерена температура, на висока температура и во лошо осветлување, симптомите на болеста можеби не се изразени воопшто.

Појаснување на вените на најмладите лисја често е еден од првите знаци на системска вирусна инфекција. Вените стануваат жолти и проucирни. Лисјата што се формираат подоцна може да бидат мозаик, испрскана или целосно жолта (хлоротична)..

Периодот на инкубација на болеста зависи од видот на вирусот, растението домаќин и состојбите во животната средина, но во секој случај тоа е неколку дена или недели.

Ако првите симптоми на вироза се забележуваат на садници, тогаш изворот на инфекција било или во семето, или инфекцијата се случила преку носач. Ако заразените растенија се наоѓаат во културата случајно или само во редови засадени од истата серија, тогаш ова укажува на тоа дека саден материјал најверојатно бил заразен. Ако заболените растенија се наоѓаат во одредени области на теренот, а појавата на заразени области се должи на разликите во почвата, има секоја причина да се претпостави ширење на вируси низ почвата.

Исто така, треба да се напомене дека постојат симптоми карактеристични за вироза, но предизвикани од други причини (лезии од фитоплазма, некои бактерии и штетници за цицање). Симптоми слични на вирусна инфекција честопати се предизвикани од нарушувања на минералната исхрана, како што се оние поврзани со недостаток на железо (сл. 1) Различни деформации на органите можат да бидат предизвикани од регулатори на раст и хербициди од различна природа (сл. 2).

Така, користејќи го методот на визуелна дијагностика, точна идентификација со надворешни знаци на оштетување од вируси и вируиди е невозможна, јасен одговор може да се добие само со инструментални методи (ензимско-поврзана имуносорбитна анализа, анализа на ПЦР, итн.).

Метод на растенија на индикатори

Метод на растенија на индикатори - Тоа е многу вообичаен метод за дијагностицирање на вирусни и вирусни заболувања и идентификување на нивните патогени. Методот за индикаторско растение се заснова на употреба на индикатори за растенија, кои во повеќето случаи даваат јасни и специфични симптоми карактеристични за одреден вид патоген. Растителните индикатори за тревки се заразени со механичка инокулација со сок, како резултат на тоа, инфекцијата може да се манифестира како локална некроза, обезбојување и инхибиција на растот.

За вирусот на аспемија од домати, младите растенија на тутун се користат како индикатор (Никотјана глутиноза), за дијагностицирање на Х-вирус од компир - сферично амарант (Гомбрена глобуса) За да се открие инфекција на домати со вирусни, клубени во форма на вретенка од клубени од компири, се користи скополија како индикатори (Scopolia sinensis) или чувствителни сорти на домат. Во некои случаи, индивидуални изолирани лисја на растенија од индикатори можат да се користат за инфекција. Вирусите толерантни со сокови се пресадуваат на индикатори со различни методи. Во ретки случаи, за пренесување на вирусот, се користат носители на инсекти и растение од паразит.

Серолошки дијагностички метод

Методот се заснова на реакција на врнежи (формирање на талог) помеѓу специфични антитела и протеини (антигени) на патогенот. Методот на серолошка дијагностика не е применлив за идентификација на вироиди поради отсуство на протеинска компонента, како и за голем број на нетолерантни вируси со слаби имуногени својства. Следниве модификации на серолошка дијагностика може да се користат за да се идентификуваат вируси во растение:

1) Имуносорбитна анализа поврзана со ензим (ЕЛИСА) - најчувствителниот метод кој ви овозможува да добиете квантитативни проценки. Се заснова на специфично препознавање на површински антигени на вирусот од страна на антитела во присуство на ензими. Овој метод е широко користен во пракса за идентификација на вируси на култури, погоден за сериски анализи.

2) Метод на капе. Се спроведува на следниов начин. На стаклена слајд, капка сок од растение се меша со капка антисерум. После неколку минути, реакцијата се оценува под микроскоп при слабо зголемување на темно поле или дури и визуелно, без микроскоп.

3) Двоен дифузен метод - спроведена во агар гел, за да се утврдат сферични и други мали вируси. Се спроведува со овој метод, во некои бунари, кои се сечат во слој на агар медиум, се додава антисерум, а во други - прочистен сок од растенија. Во гелот, вирусните честички и антитела се шират едни на други за да се исполнат, а на местото на средбата формираат различни линии на врнежи во случај на нивната комплементарна специфичност.

4) Метод на радијална имунодифузија. Користејќи го овој метод, антисерумот се додава директно во агарниот медиум, додека бунарите се полнат со растителни пиперки. Реакцијата е позитивна ако околу бунарите се формираат талог во форма на прстен..

5) Метод на апсорпција. Методот се заснова на фактот дека, пред да реагираат со антиген, антителата врзуваат некои инертен материјал на големи честички, на пример, латекс. Кога реагирате со антиген, се јавува јасно видлива аглутинација на целиот комплекс..

Метод на електронска микроскопија

На ултратинските делови на заболените растителни ткива, со употреба на електронски микроскопи, можете да ја одредите структурата, формата, па дури и големината на вирусите или вироидите. Електронски микроскоп често се користи во комбинација со серолошки методи (имуноелектронска микроскопија), а може да се детектираат вирусни честички со слоевити антитела. Методот на електронска микроскопија се користи исклучително ретко како резултат на високата цена на опремата и реагенсите, тешкотијата да се изолираат вируси и вируиди, оксидација на растителни пресеци и голем број други фактори.

Метод на електрофореза

Овој метод се заснова на раздвојување на претходно прочистените нуклеински киселини на вирус (вирус) или неговите протеини во гел под влијание на електрична струја, проследено со боење на зоните. Методот на електрофореза ви овозможува да ја утврдите масата и големината на вирусните или вирусните структури. Методот е широко користен за визуелно испитување на финалниот производ на реакцијата на синџирот полимераза. За да ги снимите резултатите, фотографирајте го гелот во пренесена или рефлектирана светлина.

Молекуларните биолошки методи се засноваат на познавање на структурата на молекулата РНК (ДНК) на вирус или вирус. Најчестиот тест е засилување (множење) на РНК секвенциите специфични за време за време на реакцијата на полимеразата на ланецот (ПЦР). Индивидуалните фрагменти на РНК изолирани од испитуваните растенија кои се специфични за само еден вид или род на вируси, се множат со ензими во присуство на прајмери ​​(соодветни олигонуклеотиди). Покрај тоа, нивниот број во финалниот производ за реакција го надминува почетниот број копии на избраниот фрагмент РНК милиони пати. Следно, РН на вирусот (ДНК) се открива со гел електрофореза или имунофлуоресценција. Методот е широко користен во практични виролошки студии..

Методот за ДНК сонда исто така се заснова на принципот на комплементарност на нуклеинските киселини. Синтетизираат специфични сонди што се хибридизираат само со специфични нуклеотидни секвенци на вирус или вирусна РНК. Во зависност од изборот на сондите, можно е да се разликуваат групи, типови па дури и видови на вируси и вироиди.

Метод на вклучување

По развојот на вируси, клетки на вирусни честички (подмножества) наречени кристали на Ивановски, кои се видливи со употреба на конвенционален лесен микроскоп, се формираат во клетките на растенијата. Секој вирус има своја форма на вирусни подмножества, кои се формираат, најчесто, во клетките на епидермисот на листовите или во клетките на влакната. На пример, вирусот на мозаик од тутун има хексагонални и кристали во форма на игла - вирусот на компир X обично формира сферични аморфни тела. За да се открие зелениот мокаичен вирус на мозаик од краставица, пресврт лисја од компири и некои други, се користат хемиски аналитички дијагностички методи..